納米PCR試劑盒使用時的注意事項有哪些?
更新時間:2022-08-22 點擊次數(shù):1165
1、組份A中含有染料,染料的加入不影響PCR反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物可直接電泳,節(jié)省時間。
2、本試劑盒檢測范圍涵蓋支原體所有種屬,真核細(xì)胞和革蘭氏陰性菌不會造成干擾,與支原體親緣關(guān)系較近的革蘭氏陽性菌在反應(yīng)中的靈敏度較支原體低1000-10000倍。
3、本試劑盒適用于檢測支原體感染,客戶如需區(qū)分感染的種屬,可將PCR產(chǎn)物切膠然后測序,進行序列比對即可知種屬類型。
4、有時可直接用細(xì)胞培養(yǎng)上清進行PCR反應(yīng)。培養(yǎng)上清中常含有高濃度的PCR抑制劑,可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果,故不建議使用此法。有些PCR抑制劑用離心可以除去,若離心不能去除,則推薦抽提基因組DNA進行PCR。而某些PCR抑制劑。
5、假陰性結(jié)果判斷方法:在測試反應(yīng)管中同時加入測試樣品和陽性對照樣品,觀察對照條帶是否出現(xiàn)。在陽性對照管出現(xiàn)對照條帶的情況下,如果測試反應(yīng)管的對照條帶和檢測條帶都沒有出現(xiàn),則可判斷為PCR反應(yīng)受到了抑制,即假陰性結(jié)果。陽性對照管如果沒有出現(xiàn)對照條帶,請檢查PCR條件是否恰當(dāng),或者與技術(shù)支持聯(lián)系。
6、每個測試樣品建議做兩個反應(yīng):一個與陽性對照樣品共同反應(yīng),排除假陰性結(jié)果,另一個單獨反應(yīng),可避免因加入陽性對照樣品所致的靈敏度降低。如果測試樣品中支原體含量很高,可能會抑制陽性對照條帶的出現(xiàn)。