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納米PCR試劑盒使用時(shí)的注意事項(xiàng)有哪些?

更新時(shí)間:2022-08-22      點(diǎn)擊次數(shù):1232
  納米PCR試劑盒使用的注意事項(xiàng):
 
  1、組份A中含有染料,染料的加入不影響PCR反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物可直接電泳,節(jié)省時(shí)間。
 
  2、本試劑盒檢測(cè)范圍涵蓋支原體所有種屬,真核細(xì)胞和革蘭氏陰性菌不會(huì)造成干擾,與支原體親緣關(guān)系較近的革蘭氏陽(yáng)性菌在反應(yīng)中的靈敏度較支原體低1000-10000倍。
 
  3、本試劑盒適用于檢測(cè)支原體感染,客戶如需區(qū)分感染的種屬,可將PCR產(chǎn)物切膠然后測(cè)序,進(jìn)行序列比對(duì)即可知種屬類型。
 
  4、有時(shí)可直接用細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行PCR反應(yīng)。培養(yǎng)上清中常含有高濃度的PCR抑制劑,可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果,故不建議使用此法。有些PCR抑制劑用離心可以除去,若離心不能去除,則推薦抽提基因組DNA進(jìn)行PCR。而某些PCR抑制劑。
 
  5、假陰性結(jié)果判斷方法:在測(cè)試反應(yīng)管中同時(shí)加入測(cè)試樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品,觀察對(duì)照條帶是否出現(xiàn)。在陽(yáng)性對(duì)照管出現(xiàn)對(duì)照條帶的情況下,如果測(cè)試反應(yīng)管的對(duì)照條帶和檢測(cè)條帶都沒有出現(xiàn),則可判斷為PCR反應(yīng)受到了抑制,即假陰性結(jié)果。陽(yáng)性對(duì)照管如果沒有出現(xiàn)對(duì)照條帶,請(qǐng)檢查PCR條件是否恰當(dāng),或者與技術(shù)支持聯(lián)系。
 
  6、每個(gè)測(cè)試樣品建議做兩個(gè)反應(yīng):一個(gè)與陽(yáng)性對(duì)照樣品共同反應(yīng),排除假陰性結(jié)果,另一個(gè)單獨(dú)反應(yīng),可避免因加入陽(yáng)性對(duì)照樣品所致的靈敏度降低。如果測(cè)試樣品中支原體含量很高,可能會(huì)抑制陽(yáng)性對(duì)照條帶的出現(xiàn)。
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