簡(jiǎn)要描述:人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞;NCM460收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好,取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí),以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
詳細(xì)介紹
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人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞;NCM460
細(xì)胞英文(簡(jiǎn)稱):NCM460
細(xì)胞名稱:人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞;NCM460
背景資料
收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好,取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí),以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
細(xì)胞來源:incell
代次:P3
規(guī)格:T25
細(xì)胞數(shù):1x10^6 cells
組織來源:結(jié)腸上皮
人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞;NCM460形態(tài):貼壁
細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:1640+10% FBS;37℃,5% CO2
傳代方法:*建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),大致的步驟是這樣:
1.從動(dòng)物胚胎或者一些剛出生的動(dòng)物的器官或者組織上取得細(xì)胞,配制成細(xì)胞懸浮液.把細(xì)胞液放到培養(yǎng)瓶中,在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)--------原代培養(yǎng).
但是,不要以為這樣就能一直無(wú)限培養(yǎng)下去.
因?yàn)?span style="font-size:16px">人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞;NCM460在那個(gè)瓶壁上生長(zhǎng)的時(shí)候,如果大量增殖,細(xì)胞之間會(huì)彼此相碰,細(xì)胞細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,出現(xiàn)一種接觸抑制.
2.我們?yōu)榱怂鼈兡芾^續(xù)增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細(xì)胞懸浮液,分開裝到好幾個(gè)瓶子里繼續(xù)培養(yǎng)--------傳代培養(yǎng).
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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